基因網數位PCR試劑組 (24 rxn)
Gn-dPCR的原理是使用兩個基因特異性引子,每個引子後跟一個相應的探針,以定義網絡的上游和下游邊界,而內部引子由與銜接子區域結合的雙向引子處理。
Gn-dPCR 產物可直接進行次世代定序(NGS),將質量讀數映射到相應的參考基因組將揭示所有讀數的基因組起源。通過計算映射到感興趣基因和對照基因的讀數的數量,可以獲得定序衍生的 CNV數值,然後可用於驗證一般dPCR衍生的 CNV數值。此外,好處是序列數據能夠提供網絡到的所有突變位點,這與傳統的dPCR 方法不同,傳統的dPCR僅限於 3 或 4 個突變位點。
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一般數位PCR (dPCR) 是一種高度敏感的方法,通常使用基因組DNA作為樣本源來檢測複製數的變異 (CNV) 和基因突變,而細胞外游離DNA (cfDNA) 是越來越多地用於診斷的非侵入性材料各種遺傳疾病。dPCR的應用也將普遍用於cfDNA分析必要技術工程因為cfDNA的樣本本身不僅數量少,而且高度片段化,並且大多數可能在同一片段中不包含兩個引物結合位點,因此不適合常規dPCR來做檢測(如圖1)。
而本公司開發的基因網數字PCR技術(gn-dPCR)旨在克服這些問題,並將dPCR的應用擴展到cfDNA分析的領域。
圖 1. 高度片段化的cfDNA片段削弱了傳統的dPCR在cfDNA分析中的應用。
Gn-dPCR的原理是使用兩個基因特異性引子,每個引子後跟一個相應的探針,以定義網絡的上游和下游邊界,而內部引子由與銜接子區域結合的雙向引子處理。該過程包括四個主要步驟: 1) 將接頭連接到目標DNA; 2) 使用依賴型銜接子的引子對構建體進行預先擴增; 3) 使用基因網數位PCR試劑組; 4)螢光信號的檢測。
Gn-dPCR 產物可直接進行次世代定序(NGS)。將質量讀數映射到相應的參考基因組將揭示所有讀數的基因組起源。通過計算映射到感興趣基因和對照基因的讀數的數量,可以獲得定序衍生的 CNV數值,然後可用於驗證一般dPCR衍生的 CNV數值。此外,好處是序列數據能夠提供網絡到的所有突變位點,這與傳統的dPCR 方法不同,傳統的dPCR僅限於 3 或 4 個突變位點。